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試劑盒應(yīng)用

本試劑盒中采用配方，能夠快速的裂解各種常見樣本，無需反復(fù)離心，通過裂解和吸附獲得高質(zhì)量的基因組DNA。該DNA 無需進(jìn)行純化可以直接用于PCR、熒光定量PCR、LAMP、STR等擴(kuò)增。

NuSmart® DNA Lysis 可用于血樣、唾液、腹水、細(xì)胞、組織、拭子、DNA 病毒、大腸桿菌、農(nóng)桿菌、葡萄球菌、環(huán)境樣本（例如擦拭物、水樣本、鞋底）、支原體、衣原體以及植物等樣品中基因組DNA的提取。

本試劑盒僅供研究使用，不可用于臨床、食品、化妝品等域。

試劑盒組成

保存條件

4oC 保存。使用將NuSmart® DNA Lysis 充分混勻。

需要準(zhǔn)備

金屬恒溫浴、離心機(jī)

使用方法

一、不同樣品的處理方法

1. 組織液的處理

（1）組織液包括組織研磨液、細(xì)胞懸液、血清、血液、唾液、尿液、精液、拭子處理液※等。取10 μL組織液置于離心管中。

※：棉簽放入500μL生理鹽水或無菌水中，浸泡5-10min，用力擠壓后取10 μL置于離心管中。

（2）加入20 μL DNA Lysis。

（3）充分混勻。

（4）置于55oC 加熱5 分鐘。溶液即為DNA 模板。

2. 組織塊的處理

（1）用眼科剪剪取1-2mm 組織塊，并將組織塊剪成肉泥狀。

（2）加入20 μL DNA Lysis。

（3）充分混勻。

（4）置于55oC 加熱5分鐘。

（5）10,000rpm 離心2-3 分鐘，取上清。上清即為DNA 模板。

3. 其他樣本的處理

（1）菌類包括大腸桿菌、農(nóng)桿菌、葡萄球菌等。取20 μL DNA Lysis 放置在離心管中。

（2）用接種針/無菌牙簽挑取菌斑或10μL 培養(yǎng)溶液放入（1）中。

（3）充分混勻。

（4）置于55oC 加熱5 分鐘。溶液即為DNA 模板。

4. DNA 病毒的處理

（1）細(xì)胞培養(yǎng)液參考“組織液的處理”。

（2）組織樣本參考“組織塊的處理”。

5. 植物樣本的處理

（1）葉片參考“組織塊的處理”。

（2）種子需磨碎后參考“組織塊的處理”。

二、推薦PCR 反應(yīng)體系

注意事項(xiàng)

一、試劑盒使用注意事項(xiàng)

（1）所有試劑按照溫度儲(chǔ)存。

（2）實(shí)驗(yàn)后務(wù)必對(duì)操作區(qū)進(jìn)行消毒，消毒方式可以采用75%乙醇或核酸消除劑等。耗材需使用商品化的無酶耗材。

（3）DNA Lysis 采用利配方，若出現(xiàn)肉眼可見小球狀物質(zhì)屬于正?，F(xiàn)象。

二、試劑盒使用過程中注意事項(xiàng)

（1）PCR 過程中推薦使用陰性對(duì)照和陽性對(duì)照。

（2）整個(gè)過程中使用的吸頭、離心管等耗材應(yīng)丟棄在含有75%乙醇或核酸消除劑的容器中，減少環(huán)境污染。

三、試劑盒使用后注意事項(xiàng)

（1）DNA Lysis 處理后的DNA 模板可在-20℃保存至少1 個(gè)月。避免反復(fù)凍融，防止基因組斷裂。

（2）PCR 反應(yīng)完成后，嚴(yán)禁在實(shí)驗(yàn)區(qū)開蓋。在污染區(qū)進(jìn)行瓊脂糖電泳，以防止氣溶膠污染。

（3）為防止試劑盒污染，請(qǐng)勿將不同批號(hào)試劑盒混用。

檢測(cè)實(shí)例

來源 范圍

細(xì)胞 293T、A549、Vero、PK15、Sp2/0、HCT-116、Marc145、ST、siHa、MCF-7

人 頭發(fā)、唾液、咽拭子、全血

小鼠 心、肝、脾、肺、腎、腦、脊柱、胃、大腸、小腸、膽囊、尾巴、腳趾、皮、耳朵、肌肉、EDAT 抗凝血、肝素鈉抗凝血、枸櫞酸鈉抗凝血

豬 心、肝、脾、肺、腎、淋巴結(jié)、精液、全血、血清

雞 胃、肝、心、肺、脾

病毒 ASFV、PRV、PPV、PCV

細(xì)菌 金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、農(nóng)桿菌、結(jié)核桿菌

真菌 酵母菌、白木耳、靈芝

植物 煙草、擬南芥、油菜、水稻、大豆、玉米、小麥、棉花、百脈根、西紅柿、土豆、茄子、胡蘿卜、龍眼、荔枝、蘋果、香蕉、葡萄、鐵皮石斛、丹參、益母草、紅花、紫草、苦參、艾葉

亞洲 鯽魚魚鰭、魚泡、魚鱗、魚籽

其他物種 支原體、衣原體