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 透射電鏡觀察細胞樣品實驗檢測 

一、 實驗儀器與試劑

表格一：實驗儀器

表格二：試劑

二、 實驗步驟

1.  醛類固定：加入1mL 2.5%戊二醛溶液（PBS 稀釋），4度固定過夜；

2．清洗：用PBS清洗4次，每次靜置15min；

3．固定：用1%溶液 4度固定2h；

4．清洗：用PBS清洗4次，每次靜置15 min；

5．脫水：用50%、70%、80%、90%乙醇梯度脫水各靜置15min(在70%乙醇中靜置過夜)，再用100%乙醇脫水2次，每次靜置20min；

6．置換：用丙酮置換2次，每次靜置15min；

7.  浸漬：過程如下：

A．丙酮：包埋劑=2：1（體積比）的浸漬液中浸漬1h；

B．丙酮：包埋劑=1：2（體積比）的浸漬液中浸漬4h；

C．純包埋劑浸漬2次, 每次24h；

8． 包埋：將樣品放入盛有純包埋劑的包埋板中；

10．聚合：將包埋板置于65℃條件下各聚合48h以上；
11．修塊：將包埋頭修成梯形，且樣品表面積小于0.2mm×0.2mm；

12．超薄切片：切片厚度70nm；

13．染色：醋酸雙氧鈾染色 10min后清洗；

          醋酸鉛染色 10min后清洗；

14. 上機檢測。

透射電鏡制備注意事項(細胞)

1、細胞數量: > 1*10的6次方;

2、消化細胞時要注意不要過度，及時用含血清的培養液終止消化;

3、終止消化后，預冷的PBS (pH 7.4 )洗細胞1-2次離心(1500rpm, 5min)棄上清(細胞收集在1.5ml的EP管中) ;

4、加入1mL 2.5%戊二醛溶液(需用PBS配制該溶液)，可用吸管輕輕吹散細胞，使細胞懸浮于固定液中;

5、4度固定過夜后寄出 (寄送時加冰袋，并用2.5%戊二醛溶液將EP管中剩余空間充滿)。

腎臟組織樣本制備步驟：

1、迅速取材；2、PBS漂洗2次，切成小塊（米粒大小）；3、快速放入2.5%戊二醛固定液中，4度固定過夜；4、固定液將整個容器里面的空間都充滿，封口膜封口；5、多加冰袋運輸。

我司擁有成熟的技術團隊和科學的管理規范，實驗流程均嚴格按照SOP操作，公司擁有的各類的儀器設備為各類服務的順利開展及質量提供有力的支撐。公司已經建立起多個實驗平臺，包括細胞培養、克隆構建、病毒包裝、組織分析、分子檢測等。